微生物檢驗中，無菌操作是重中之重。具體注意事項如下：

一、關于采用酒精棉球消毒的注意事項

1.用酒精棉球擦拭雙手，包括手掌、手背，尤其是手指，更換一個酒精棉球擦拭酒精燈附近（約10cm）桌面。

2.點燃酒精燈，在酒精燈附近拆器皿包裝，并對器皿做相應標記。

3.用酒精棉球再次擦拭雙手，開始實驗操作。

4.消毒用酒精棉球濕度以不擠壓出酒精為宜。

二、關于酒精燈正確使用的注意事項

1.酒精量以大于1/3，小于2/3為正確量。

2.防風罩應小口朝上放置于酒精燈上，反過來放置會導致氧氣沒有充分燃燒。

3.使用酒精燈前要檢查燈芯帽是否蓋得太緊，以防酒精不能上升，影響酒精燈燃燒。點燃酒精燈時嚴禁兩個酒精燈對點。

4.熄滅酒精燈方法：先用燈芯帽扣壓并熄滅火焰，再揭帽重新扣壓一次。這樣可防止蒸汽倒吸燈帽，再次使用酒精燈時難以揭開燈帽。

5.做樣品稀釋及從試管取樣實驗時，酒精燈應放在操作人員和試管架之間，便于無菌操作。

三、關于吸量管使用的注意事項

1.左手拿洗耳球，右手持吸量管，用右手食指平按住吸量管的頂部。

2.吸取樣品后進行定量時，吸量管吸液口應貼附于試管內壁；放樣時，吸量管吸液口也應貼附于試管約1/2內壁，不應貼附在管口處放液。吸量管應盡可能垂直放液。

3.用吸量管往空平皿加入1mL溶液時，吸量管應貼附于平皿底部中央位置放液；用吸量管在平板上加入0.1mL溶液做涂布接種時，吸量管應垂直、懸空放液于平板中央。

4.因吸量管拆封包裝后應馬上使用，故無須對吸量管吸液口過火焰消毒。

5.整個取樣放樣的過程應盡可能保證試管口或錐瓶口靠近酒精燈火焰附近。

四、關于樣品梯度稀釋的注意事項

1.從試管架上取出所需試管于酒精燈火焰附近拔出試管塞，并在火焰外焰處對試管口過火焰進行消毒。

2.將試管放回試管架后用吸量管進行取樣，然后取出該試管于火焰附近調節吸量管內溶液體積。

3.取樣完成后對試管口再次消毒并塞上試管塞，將試管放回試管架原處。

4.從試管架上取出所需加樣的試管于火焰附近進行加樣放液操作。

五、關于培養皿記號的注意事項

1.標記統一寫在平皿底部邊緣，以“字數少、字體小、清晰、明確”為原則。

2.標記內容包括：班級、學號、日期、培養基名稱、稀釋級。

六、關于平板制備的注意事項

1.打開培養皿的方法：左手小指、無名指、中指及一部分掌腹托住平皿底部，食指和拇指張開輕握皿蓋側部，以食指為支點，擺動拇指打開皿蓋。打開的皿口應向著酒精燈的外焰。切勿把開口朝向操作人員。

2.手持錐形瓶中下部將瓶中培養基傾倒入平皿中央位置，錐瓶口不應接觸平皿。

培養基應一次注入夠量，不應分次加入（除實驗特殊規定）。

3.混勻培養基時應將裝有混合培養基的平皿于手中順時針輕微搖勻2～3次，平放于桌面上后再次順時針搖勻2～3次，整個過程應在培養基尚未開始凝固時完成。學生只要有其中一個搖勻動作也算完成混勻培養基。

4.手中裝有培養基的平皿應水平放置于臺面上，不應從臺面邊緣往里推。在位置允許的情況下，應分開平攤放置待凝。

七、關于涂布方式的注意事項

1.L型涂布棒應放平涂布。

2.涂布時應從中間按同一個方向打圈方式往周邊涂布，可以重復涂布。

3.從高稀釋級往低稀釋級涂布時，可以不用更換涂布棒，也不用灼燒涂布棒。涂布同一個稀釋級的不同平板時也不用灼燒涂布棒。但是從低稀釋級往高稀釋級涂布時，如不更換涂布棒，一定要灼燒涂布棒（原則上不采用這個涂布順序）。

八、關于培養基接種的注意事項

1.液體培養基接種時不強調接種環是否應接觸到液體培養基。

2.單手持兩支大試管切忌手部覆蓋培養基面，空白管在里面（近操作人員），菌種在外面。

九、關于接種環滅菌的注意事項

取完固體菌時，應先垂直灼燒環部再往上灼燒其余接種絲；取完液體菌時，應先灼燒非環處的其它接種絲，再灼燒環部，這樣可避免環上液體突然遇熱而爆破濺出，造成污染。

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